ARTICLE ORIGINAL
Une méthode pour la préparation rapide de Tissus Frais pour le Microscope
Dr Louis B. Wilson
JAMA. 1905;45(9):1737
Quand je travaillais en pathologie générale, j'ai partagé la méfiance communément répandue au sujet de l’usage de sections gelées de tissus frais pour diagnostic microscopique. En prenant récemment la charge du laboratoire des chirurgiens, du Dr. Mayo, j'ai testé avec soin différentes méthodes publiées jusqu'ici et les ai trouvées aussi lentes l'une que l'autre concernant l’obtention des résultats pendant que les patients attendaient sous anesthésie et j’obtenais un compte-rendu cellulaire assez pauvre. Après une expérimentation considérable la technique suivante a été découverte, et au cours des six derniers mois elle a produit des préparations uniformément excellentes:
1. Les morceaux de tissu frais de moins de 2X10X10 mm sont congelés dans la solution de dextrine et découpés en sections de 10 à 15 microns d’épaisseur.
2. Les sections sont retirées du couteau avec la pointe du doigt et mises à dégeler.
3. Les sections sont déroulées avec des brosses à poils de chameau dans une solution de NaCl à 1%.
4. Les sections sont colorées 10 à 20 secondes dans une solution polychrome neutre de bleu de méthylène d'Unna.
5. Elles sont lavées dehors dans une solution de NaCl à 1%.
6. Elles sont montées dans le milieu glucosé de Brun.
Le microtome que j'utilise est le Spencer automatique avec un apport de CO2, dans lequel l'ébonite est substituée au cuivre dans le mur de la chambre réfrigérante, donc isolant la plaque réfrigérante. Le dégel de la section au doigt empêche la formation de bulles dans une grande mesure. Les brosses en poils de chameaux utilisées par les artistes sont beaucoup plus utiles pour manier des tissus que celles fournies habituellement par les maisons d’approvisionnement des laboratoires. Un verre de montre lourd, peu profond sur une surface noire est le meilleur récipient où dérouler des sections. Les sections sont maniées au mieux par une arracheuse formée dans une petite tringle du verre courbé à angle adéquat. La section est constamment mise en mouvement pendant la coloration. La coloration est contenue dans une toute petite tasse pour faciliter la récupération rapide de la section au moyen de l’arracheuse. Le lavage est effectué dans plusieurs onces de solution salée dans un plat en porcelaine blanc et est continué tandis que la coloration part librement. Le milieu glucosé moyen de Brun (qui est fait d’un mélange d'eau distillée 140 c.c., glucose 40 c.c., et glycérine 10 c.c., auquel on a ajouté de la solution camphrée 10 c.c. ensuite filtré), est contenu dans un plat ovale de porcelaine (un modèle "non décoré épousant parfaitement la forme") d'une telle dimension qu’une lame de trois pouces d’un côté, part du fond du plat jusqu’à l’autre bord. La section est étalée sur la lame quand elle est dans cette position. La lame est retirée alors avec soin du plat, le liquide en excès est enlevé, une lamelle couvre-objet est placée sur la section et le spécimen est prêt pour le microscope.
Le processus entier prend une minute et demie depuis le moment où le tissu est placé sur la plaque réfrigérante du microtome jusqu'à ce que le spécimen coloré soit sur la plaque du microscope. Le coloris résultant est uniformément bon avec les éléments du tissu bien contrastés en rouge vif, pourpre et bleu sombre.
Un diagnostic peut être fait avec de telles préparations dans un grand pourcentage de cas chirurgicaux dans lesquels un diagnostic est possible par l'étude de sections de la même épaisseur de coupe de tissus fixes et colorés avec de l’hématoxyline et de l’éosine.
Voir www.jama.com pour une forme PDF de l’article original du JAMA.
